发布日期:2025-10-12 04:45 点击次数:117
补体成分 5a 受体(C5aR),又被称为 CD88,是一种重要的 G 蛋白偶联受体(GPCR),在人体免疫系统中扮演着关键角色。它主要表达于多种免疫细胞表面,如中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞以及某些 T 细胞亚型等,同时在非免疫细胞如内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞上也有一定程度的表达。
C5aR 的配体主要是补体系统激活后产生的补体
成分 5a(C5a)。补体系统是人体先天免疫系统的重要组成部分,当机体受到病原体入侵、组织损伤等刺激时,补体系统会被激活,经过一系列级联反应产生 C5a。C5a 作为一种强效的炎症介质,能够与靶细胞表面的 C5aR 特异性结合,从而启动细胞内的信号传导通路,引发一系列生物学效应。
生理功能
(一)参与炎症反应调节
C5a 与 C5aR 结合后,能快速激活免疫细胞,促使其释放多种炎症因子,如肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)、白细胞介素 - 1β(IL-1β)、白细胞介素 - 6(IL-6)等。这些炎症因子会进一步放大炎症反应,吸引更多的免疫细胞向炎症部位聚集,增强机体对病原体的清除能力。同时,C5aR 还能调节免疫细胞的趋化运动,使中性粒细胞、单核细胞等沿着 C5a 浓度梯度向炎症区域迁移,及时发挥吞噬和杀灭病原体的作用。
展开剩余75%在正常的炎症反应中,C5aR 介导的炎症反应有助于机体清除病原体和受损组织,促进组织修复。然而,当炎症反应过度或失控时,C5aR 介导的炎症反应会导致组织损伤和炎症疾病的发生,如类风湿关节炎、急性呼吸窘迫综合征、败血症等。
(二)调节免疫细胞的活化与功能
C5aR 不仅能介导炎症反应,还能调节免疫细胞的活化与功能。研究表明,C5a 与 C5aR 结合后,能激活中性粒细胞的呼吸爆发,增强其吞噬能力和杀灭病原体的活性。同时,C5aR 还能调节单核细胞和巨噬细胞的分化与成熟,促进其分泌细胞因子和趋化因子,参与免疫调节和炎症反应。
此外,C5aR 在 T 细胞的活化与分化中也发挥着重要作用。C5a 能促进 T 细胞的增殖和活化,增强其分泌细胞因子的能力,调节 T 细胞的免疫应答。同时,C5aR 还能影响 T 细胞的分化方向,促进 Th1 和 Th17 细胞的分化,参与细胞免疫和炎症反应。
(三)参与组织修复与再生
除了在免疫和炎症反应中的作用外,C5aR 还参与组织修复与再生过程。研究发现,C5a 能促进内皮细胞的增殖和迁移,增强血管生成,为受损组织提供充足的氧气和营养物质,促进组织修复。同时,C5aR 还能调节成纤维细胞的增殖和分化,促进胶原蛋白的合成和沉积,参与组织的纤维化和修复过程。
在创伤愈合过程中,C5aR 介导的信号通路能够促进炎症细胞的聚集和活化,清除受损组织和病原体,同时促进血管生成和组织修复细胞的增殖与分化,加速创伤愈合。然而,当 C5aR 介导的信号通路异常时,会导致创伤愈合延迟或瘢痕形成过度等问题。
茁彩生物酶联免疫法检测 C5aR 含量的原理
酶联免疫法(ELISA)是一种常用的免疫检测技术,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。茁彩生物采用的酶联免疫法检测 C5aR 含量,主要基于抗原与抗体的特异性结合反应以及酶的催化作用。其具体检测原理如下:
(一)包被抗体
首先,将针对 C5aR 的特异性单克隆抗体(包被抗体)包被在酶标板的微孔表面。包被抗体能够与样本中的 C5aR 特异性结合,形成抗原 - 抗体复合物。在包被过程中,需要控制抗体的浓度、包被时间和温度等条件,以确保包被抗体能够均匀、稳定地结合在酶标板表面,提高检测的灵敏度和特异性。
(二)样本孵育
将待检测的样本(如血清、血浆、细胞裂解液等)加入到包被好抗体的酶标板微孔中,在适宜的温度和时间下进行孵育。样本中的 C5aR 会与微孔表面的包被抗体特异性结合,形成包被抗体 - C5aR 复合物。孵育时间和温度会影响抗原与抗体的结合效率,通常需要根据样本类型和检测要求进行优化。
(三)洗涤
孵育结束后,用洗涤液反复洗涤酶标板微孔,去除未与包被抗体结合的杂质和其他非特异性结合物质,以减少背景干扰,提高检测的准确性。洗涤过程需要充分、彻底,避免残留的杂质影响后续的检测结果。
(四)加入酶标抗体
向洗涤后的酶标板微孔中加入辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)标记的针对 C5aR 的特异性抗体(酶标抗体)。酶标抗体能够与包被抗体 - C5aR 复合物中的 C5aR 特异性结合,形成包被抗体 - C5aR - 酶标抗体复合物。酶标抗体的浓度和孵育条件也需要进行优化,以确保其能够有效地结合到复合物上,并具有较高的酶活性。
(五)再次洗涤
酶标抗体孵育结束后,再次用洗涤液洗涤酶标板微孔,去除未与包被抗体 - C5aR 复合物结合的酶标抗体,避免游离的酶标抗体对后续的酶促反应产生干扰。
(六)酶促反应与显色
向洗涤后的酶标板微孔中加入相应的底物溶液(如 HRP 的底物邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB),AP 的底物对硝基苯磷酸酯(pNPP)等)。酶标抗体上的酶会催化底物发生化学反应,产生有色产物。反应的强度与样本中 C5aR 的含量成正比,即 C5aR 含量越高,酶促反应产生的有色产物越多,颜色越深。
(七)终止反应与结果检测
当酶促反应进行到适宜的时间后,加入终止液(如硫酸溶液)终止反应。终止液能够使酶失去活性,停止底物的反应,从而固定反应的结果。然后,使用酶标仪在特定的波长下测定每个微孔的吸光度值(OD 值)。根据标准品制作的标准曲线,通过测定样本的 OD 值,即可计算出样本中 C5aR 的含量。
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